Medium 199 mit Earle's Salzen, mit 20 mM HEPES ohne NaHCO3

HEPES

HEPES to związek organiczny, o charakterystycznych jonach obojnaczych, stosowany jako czynnik buforujący. Jest jednym z buforów opracowanych przez Gooda. HEPES jest szeroko stosowany w hodowlach komórkowych, głównie z powodu lepszego utrzymywania fizjologicznego pH, pomimo następujących zmian stężenia dwutlenku węgla, w porównaniu z buforami dwuwęglanowymi, powszechnie używanymi w hodowlach komórkowych. Dysocjacja wody zmniejsza się wraz ze spadkiem temperatury, ale stała dysocjacji innych buforów nie zmienia się istotnie wraz ze zmianą temperatury. HEPES zachowuje się jak woda poniważ jego dysocjacja maleje wraz ze spadkiem temperatury. Dzięki temu HEPES jest bardzo efektywnym czynnikiem buforującym podtrzymującym strukturę i funkcję enzymów w niskich temperaturach.Zaleca się przechowywanie roztworów zawierających HEPES zdala od światła, ze względu na fototoksyczność HEPES- pod wpływem światła HEPES wydziela nadtlenek wodoru.
HEPES posiada następujące właściwości: pKa1 (temp. 25 C) = 3, pKa2 (temp. 25 C) = 7.5, przydatne zakresy pH = 2.5 do 3.5 lub 6.8 do 8.2.